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項目咨詢
信號通路驗證的核心檢測項目聚焦于經(jīng)典及新興信號轉(zhuǎn)導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)的分子事件解析:
MAPK/ERK通路:ERK1/2磷酸化水平測定、Ras/Raf蛋白激活狀態(tài)分析
PI3K/AKT/mTOR通路:AKT Ser473磷酸化定量、PTEN酶活性檢測
Wnt/β-catenin通路:β-catenin核轉(zhuǎn)位觀測、TCF/LEF轉(zhuǎn)錄活性測定
JAK-STAT通路:STAT蛋白二聚化分析、SOCS蛋白表達(dá)譜篩查
NF-κB通路:IκBα降解動力學(xué)研究、RelA核定位驗證
功能驗證實驗包括但不限于:報告基因活性測定(如熒光素酶系統(tǒng))、蛋白質(zhì)互作分析(Co-IP/FRET)、下游效應(yīng)分子定量(細(xì)胞周期蛋白、凋亡標(biāo)志物)等。
本類檢測適用于以下研究體系:
細(xì)胞模型:原代培養(yǎng)細(xì)胞/永生化細(xì)胞系的通路激活閾值測定
組織樣本:冰凍/石蠟包埋組織的空間分布特征解析(需配合激光顯微切割技術(shù))
體液樣本:血清/腦脊液中可溶性信號分子的超敏檢測
模式生物:斑馬魚/小鼠模型的在體信號動態(tài)監(jiān)測
特殊樣本處理要求包括:磷酸化蛋白樣本需添加蛋白酶/磷酸酶抑制劑;RNA類樣本需DNase處理及完整性驗證(RIN≥7)。
主流技術(shù)體系按檢測目標(biāo)分類如下:
蛋白質(zhì)層面
Western Blot:半定量分析磷酸化修飾比例(需設(shè)置總蛋白內(nèi)參)
ELISA:高靈敏度定量分泌型信號分子(IL-6/TNF-α等)
流式細(xì)胞術(shù):單細(xì)胞水平信號異質(zhì)性分析(Phosflow技術(shù))
核酸層面
qRT-PCR:通路相關(guān)基因表達(dá)譜分析(ΔΔCt法)
RNA-Seq:全轉(zhuǎn)錄組水平通路調(diào)控網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建
功能性驗證
siRNA/shRNA介導(dǎo)的基因沉默效率驗證(敲除率≥70%)
CRISPR/Cas9基因編輯模型的表型確認(rèn)
關(guān)鍵儀器平臺及其技術(shù)參數(shù)要求:
蛋白質(zhì)印跡系統(tǒng):ChemiDoc MP成像系統(tǒng)(檢測限≤1pg),配備Image Lab軟件進行條帶定量分析
流式細(xì)胞儀:BD LSRFortessa(配置≥4激光器),支持多色Phosflow檢測(建議通道數(shù)≤18)
實時熒光定量PCR儀:ABI QuantStudio 7 Pro(動態(tài)范圍≥8個數(shù)量級),配套TaqMan探針體系
高內(nèi)涵成像系統(tǒng):PerkinElmer Operetta CLS(物鏡NA≥0.75),支持亞細(xì)胞定位定量分析
質(zhì)譜平臺:Orbitrap Fusion Lumos(分辨率≥240,000@m/z200),用于磷酸化位點鑒定及修飾豐度測定
所有儀器均需定期執(zhí)行性能驗證:流式細(xì)胞儀需進行CV值校準(zhǔn)(≤2%),qPCR儀需完成擴增效率測試(90-110%)。
銷售報告:出具正規(guī)第三方檢測報告讓客戶更加信賴自己的產(chǎn)品質(zhì)量,讓自己的產(chǎn)品更具有說服力。
研發(fā)使用:擁有優(yōu)秀的檢測工程師和先進的測試設(shè)備,可降低了研發(fā)成本,節(jié)約時間。
司法服務(wù):協(xié)助相關(guān)部門檢測產(chǎn)品,進行科研實驗,為相關(guān)部門提供科學(xué)、公正、準(zhǔn)確的檢測數(shù)據(jù)。
大學(xué)論文:科研數(shù)據(jù)使用。
投標(biāo):檢測周期短,同時所花費的費用較低。
準(zhǔn)確性較高;工業(yè)問題診斷:較短時間內(nèi)檢測出產(chǎn)品問題點,以達(dá)到盡快止損的目的。
北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所承諾:我們將根據(jù)不同產(chǎn)品類型的特點,并結(jié)合不同行業(yè)和國家的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn),選擇適當(dāng)?shù)臋z測項目和方法進行分析測試,或根據(jù)您的要求進行試驗分析。為了不斷改進我們的工作,我們致力于提高產(chǎn)品質(zhì)控分析、使用性能檢測能力,并持續(xù)加強我們團隊的科研技術(shù)。同時,我們將積極跟進新的技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn),以最大程度地滿足您的需求和市場要求。
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