檢測(cè)項(xiàng)目

卡氏肺孢子蟲(chóng)實(shí)驗(yàn)室診斷主要包含以下核心項(xiàng)目：

1.病原體直接檢測(cè)：通過(guò)顯微鏡觀察滋養(yǎng)體與包囊形態(tài)學(xué)特征，采用吉姆薩染色法顯示滋養(yǎng)體胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，六胺銀染色法特異性標(biāo)記包囊囊壁成分。定量評(píng)估每視野病原體負(fù)荷量。

2.基因擴(kuò)增檢測(cè)：針對(duì)線粒體大亞基rRNA（mtLSUrRNA）基因設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，可檢出低至10拷貝/μL的微量DNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)治療過(guò)程中病原體載量變化。

3.β-D-葡聚糖檢測(cè)：通過(guò)G試驗(yàn)測(cè)定血清中真菌細(xì)胞壁成分濃度，閾值＞80pg/mL提示感染可能。需排除其他真菌感染導(dǎo)致的假陽(yáng)性干擾。

4.乳酸脫氫酶（LDH）監(jiān)測(cè)：肺泡上皮損傷時(shí)血清LDH水平顯著升高（常＞450U/L），可作為輔助診斷指標(biāo)。

檢測(cè)范圍

本檢測(cè)體系適用于以下臨床場(chǎng)景：

1.免疫功能缺陷患者：HIV感染者CD4+T細(xì)胞＜200/μL時(shí)開(kāi)展預(yù)防性篩查；造血干細(xì)胞移植受者術(shù)后3個(gè)月內(nèi)定期監(jiān)測(cè)。

2.呼吸系統(tǒng)癥狀評(píng)估：不明原因發(fā)熱伴進(jìn)行性呼吸困難患者（SpO?＜92%），尤其胸片顯示彌漫性間質(zhì)浸潤(rùn)者。

3.治療療效評(píng)價(jià)：抗肺孢子蟲(chóng)治療72小時(shí)后復(fù)查病原體載量及LDH水平變化。

4.流行病學(xué)研究：醫(yī)院內(nèi)感染暴發(fā)時(shí)進(jìn)行基因分型溯源分析。

樣本類(lèi)型包括肺泡灌洗液（診斷金標(biāo)準(zhǔn)）、誘導(dǎo)痰液（敏感性約50%）、肺組織活檢標(biāo)本及外周血標(biāo)本。

檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)化操作流程包含以下關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)：

顯微鏡檢查法

①樣本預(yù)處理：肺泡灌洗液經(jīng)3000rpm離心15分鐘濃縮后制片；痰液標(biāo)本需用0.1%二硫蘇糖醇液化處理。
②染色操作：吉姆薩染色需甲醇固定5分鐘，工作液染色30分鐘；六胺銀染色需鉻酸氧化10分鐘，硝酸銀60℃浸染40分鐘。
③鏡檢標(biāo)準(zhǔn)：油鏡（1000）下觀察包囊特征性"括號(hào)狀"囊壁結(jié)構(gòu)及滋養(yǎng)體出芽現(xiàn)象。陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)為至少發(fā)現(xiàn)3個(gè)典型包囊/100倍視野。

分子診斷技術(shù)

①核酸提?。翰捎霉枘z膜吸附法提取樣本DNA，A260/A280比值應(yīng)達(dá)1.8-2.0。
②PCR擴(kuò)增：95℃預(yù)變性5分鐘后進(jìn)入35個(gè)循環(huán)（94℃30s,55℃30s,72℃45s），最后72℃延伸7分鐘。
③產(chǎn)物分析：常規(guī)PCR通過(guò)2%瓊脂糖凝膠電泳觀察300bp條帶；實(shí)時(shí)定量PCR根據(jù)Ct值計(jì)算拷貝數(shù)。
④質(zhì)控要求：每批次設(shè)置陰性對(duì)照（無(wú)模板）及陽(yáng)性對(duì)照（含10拷貝質(zhì)粒）。

免疫學(xué)檢測(cè)

①G試驗(yàn)：采用鱟試劑動(dòng)態(tài)比濁法測(cè)定β-D-葡聚糖濃度。
②單克隆抗體染色：使用熒光標(biāo)記的3F6單抗進(jìn)行直接免疫熒光檢測(cè)。
③結(jié)果判讀需結(jié)合臨床排除假陽(yáng)性因素：血液透析患者因纖維素膜暴露可能出現(xiàn)G試驗(yàn)假陽(yáng)性；新生兒因胎盤(pán)轉(zhuǎn)移抗體可能導(dǎo)致血清學(xué)假陰性。

檢測(cè)儀器

標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配置以下核心設(shè)備：

光學(xué)顯微鏡系統(tǒng)
配備100油浸物鏡及微分干涉對(duì)比裝置（DIC），建議配置數(shù)字成像系統(tǒng)用于形態(tài)學(xué)復(fù)核存檔。

分子生物學(xué)平臺(tái)
梯度PCR儀需具備熱蓋功能防止蒸發(fā)；實(shí)時(shí)定量PCR儀應(yīng)配置FAM/HEX雙通道熒光檢測(cè)模塊。

全自動(dòng)酶標(biāo)儀
波長(zhǎng)范圍涵蓋340-750nm，支持動(dòng)力學(xué)法測(cè)定G試驗(yàn)反應(yīng)速率。

生物安全設(shè)備
Ⅱ級(jí)生物安全柜用于樣本前處理；高速離心機(jī)需配備氣溶膠密封轉(zhuǎn)子。

質(zhì)量控制設(shè)備
核酸濃度測(cè)定需使用紫外分光光度計(jì)；電泳系統(tǒng)需配置恒壓電源及凝膠成像裝置。

輔助設(shè)備
恒溫孵育箱維持37℃培養(yǎng)條件；超低溫冰箱（-80℃）用于保存標(biāo)準(zhǔn)品及陽(yáng)性對(duì)照

檢測(cè)報(bào)告作用

檢測(cè)報(bào)告作用

銷(xiāo)售報(bào)告：出具正規(guī)第三方檢測(cè)報(bào)告讓客戶更加信賴(lài)自己的產(chǎn)品質(zhì)量，讓自己的產(chǎn)品更具有說(shuō)服力。

研發(fā)使用：擁有優(yōu)秀的檢測(cè)工程師和先進(jìn)的測(cè)試設(shè)備，可降低了研發(fā)成本，節(jié)約時(shí)間。

司法服務(wù)：協(xié)助相關(guān)部門(mén)檢測(cè)產(chǎn)品，進(jìn)行科研實(shí)驗(yàn)，為相關(guān)部門(mén)提供科學(xué)、公正、準(zhǔn)確的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

大學(xué)論文：科研數(shù)據(jù)使用。

投標(biāo)：檢測(cè)周期短，同時(shí)所花費(fèi)的費(fèi)用較低。

準(zhǔn)確性高;工業(yè)問(wèn)題診斷：較短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)出產(chǎn)品問(wèn)題點(diǎn)，以達(dá)到盡快止損的目的。

我們的承諾

　　北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所承諾：我們將根據(jù)不同產(chǎn)品類(lèi)型的特點(diǎn)，并結(jié)合不同行業(yè)和國(guó)家的法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)，選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)項(xiàng)目和方法進(jìn)行分析測(cè)試，或根據(jù)您的要求進(jìn)行試驗(yàn)分析。為了不斷改進(jìn)我們的工作，我們致力于提高產(chǎn)品質(zhì)控分析、使用性能檢測(cè)能力，并持續(xù)加強(qiáng)我們團(tuán)隊(duì)的科研技術(shù)。同時(shí)，我們將積極跟進(jìn)新的技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)，以最大程度地滿足您的需求和市場(chǎng)要求。