檢測(cè)項(xiàng)目

布氏桿菌檢測(cè)涵蓋病原體鑒定與免疫應(yīng)答分析兩大體系：

• 病原學(xué)檢測(cè)：包括血液/組織樣本的細(xì)菌培養(yǎng)與分離、革蘭染色鏡檢及生化鑒定
• 血清學(xué)檢測(cè)：SAT（試管凝集試驗(yàn)）、RBPT（玫瑰紅平板試驗(yàn)）、Coombs試驗(yàn)及IgG/IgM抗體分型
• 分子生物學(xué)檢測(cè)：實(shí)時(shí)熒光定量PCR（靶向BCSP31基因）、多重PCR及全基因組測(cè)序
• 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：豚鼠接種試驗(yàn)用于疑難樣本的病原體復(fù)蘇培養(yǎng)

檢測(cè)范圍

布氏桿菌檢測(cè)適用于以下場(chǎng)景：

• 臨床診斷：發(fā)熱待查患者血清學(xué)篩查與確診病例的療效監(jiān)測(cè)
• 動(dòng)物檢疫：牛/羊/豬等易感動(dòng)物的定期監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查
• 食品安全：生鮮乳及乳制品的微生物污染風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估
• 職業(yè)暴露：獸醫(yī)、屠宰場(chǎng)工作人員等高危人群的定期健康篩查
• 環(huán)境監(jiān)測(cè)：養(yǎng)殖場(chǎng)土壤、水源及器械表面的污染溯源分析

檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)化操作流程包含以下關(guān)鍵步驟：

• 樣本采集規(guī)范：
  • 血液樣本采用含SPS抗凝劑的真空采血管（成人≥5ml）
  • 乳汁樣本需無菌采集后置4℃保存（≤24h）
  • 流產(chǎn)胎兒組織需取脾/肝/胃內(nèi)容物進(jìn)行雙份采樣
• 病原體分離培養(yǎng)：
  • 使用Castaneda雙相培養(yǎng)基進(jìn)行28天持續(xù)培養(yǎng)（5%CO?,37℃）
  • 疑似菌落經(jīng)柯茲洛夫斯基染色確認(rèn)（紅色球桿菌）
  • 生化鑒定包括H?S產(chǎn)生試驗(yàn)、尿素酶試驗(yàn)及硫堇/復(fù)紅耐受試驗(yàn)
• 血清學(xué)試驗(yàn)要點(diǎn)：
  • SAT試驗(yàn)需設(shè)置1:25至1:800系列稀釋度（≥1:100判陽性）
  • RBPT試驗(yàn)應(yīng)在室溫(20-25℃)下觀察凝集反應(yīng)（15-20min）
  • Coombs試驗(yàn)用于不完全抗體檢測(cè)（二抗為抗人球蛋白）
• 分子檢測(cè)技術(shù)參數(shù)：
  • DNA提取采用磁珠法（最低檢出限10CFU/ml）
  • 實(shí)時(shí)熒光PCR引物設(shè)計(jì)靶向IS711插入序列（擴(kuò)增產(chǎn)物223bp）
  • 熔解曲線分析區(qū)分B.abortus（Tm值84.50.5℃）與B.melitensis（Tm值86.00.5℃）

檢測(cè)儀器

實(shí)驗(yàn)室需配置以下核心設(shè)備系統(tǒng)：

• 生物安全設(shè)備：
  • Ⅱ級(jí)生物安全柜（符合NSF49標(biāo)準(zhǔn)）用于活菌操作
  • 高壓滅菌器（≥121℃,30min滅菌周期）
  • 負(fù)壓隔離培養(yǎng)系統(tǒng)（適用于BSL-3實(shí)驗(yàn)室）
• 微生物培養(yǎng)系統(tǒng)：
  • 全自動(dòng)血培養(yǎng)儀（支持需氧/厭氧雙模式）
  • CO?恒溫培養(yǎng)箱（溫度波動(dòng)0.5℃）
  • 菌落計(jì)數(shù)分析儀（分辨率≤0.1mm）
• 血清學(xué)分析平臺(tái)：
  • 全自動(dòng)酶標(biāo)儀（支持450nm/630nm雙波長(zhǎng)讀?。?/li>
  • 微量移液工作站（精度1%）
  • 免疫印跡成像系統(tǒng)（CCD分辨率≥500萬像素）
• 分子生物學(xué)設(shè)備：
  • 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（支持TaqMan探針技術(shù)）
  • 核酸提取儀（通量≥96樣本/批次）
  • 電泳系統(tǒng)（電壓范圍5-300V可調(diào)）

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