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CUT&Tag(CleavageUnderTargetsandTagmentation),即靶向剪切及轉(zhuǎn)座酶技術(shù),是?種利?酶錨定技術(shù)進??效、?分辨率的DNA測序?庫構(gòu)建?法,也是替換傳統(tǒng)的ChIP-Seq?以研究蛋?質(zhì)-基因組互作關(guān)系研究的新?法,屬于新?代超微量ChIPSeq技術(shù)。可?于檢測組蛋?、RNApolymeraseII和轉(zhuǎn)錄因?等具有DNA結(jié)合功能的蛋?種類,對表觀遺傳學(xué)、腫瘤和?細胞等領(lǐng)域的研究具有重要意義。
CUT&Tag(Cleavage Under Target & Tagmentation)技術(shù)是一種研究蛋白質(zhì)-DNA互作的新方法,它與ChIP-seq研究目的相同,在建庫細胞量、信噪比、樣本重復(fù)性等都有優(yōu)勢。
CUT&Tag 方法中用到了預(yù)裝接頭 DNA 并與蛋白 A/G 融合的超高活性 Tn5 轉(zhuǎn)座酶。這種融合蛋白能與一抗結(jié)合,在抗體附近切割 DNA,并插入帶有接頭序列的短標簽?;厥諛撕灮?DNA 片段后,使用引物識別添加的標簽中的序列進行 PCR 擴增,以生成測序文庫。
原理簡介:
在抗體引導(dǎo)下,ChiTag酶僅在?的組蛋?修飾標志、轉(zhuǎn)錄因?、染?質(zhì)調(diào)控蛋?結(jié)合染?質(zhì)的局部進??的 DNA的?段化的同時添加測序接頭,并釋放到細胞外,?絕?部分?關(guān)的染?質(zhì)還留在細胞核內(nèi),因?整個實驗的信噪??幅提?,同時簡化了實驗步驟。該?法可?管式?通量應(yīng)?,并可與單細胞測序平臺「?縫」結(jié)合。ChiTag酶在打斷基因組的同時加上接頭,不需要繁瑣的補平加 A加接頭,在?天內(nèi)可以完成從細胞到測序?庫制備全流程。
CUT&Tag
1、細胞滲透性處理
2、一抗進入細胞,與目的蛋白結(jié)合,二抗進入細胞,與一抗結(jié)合
4、加入Mg2+激活轉(zhuǎn)座體,片段化目的蛋白局部DNA
5、提取DNA, PCR,文庫構(gòu)建完成
8、高通量測序
參數(shù)
甲醛交聯(lián)
超聲破碎
獲取片段化DNA方法
細胞起始量
不需要
(T5可直接在DNA片段兩喘加測序接頭,一次PCR增即可)
完成時間
二抗
細胞核提取
低樣本需求:細胞起始量較低(單細胞-5*105 ),從百萬級降低到單細胞?平;
高重復(fù)性:CUT&Tag方法具有較高的重復(fù)性,可在相同樣本中得到一致的結(jié)果;
高信噪比:相比傳統(tǒng)的染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)方法,CUT&Tag方法信噪比較高,減少非特異性結(jié)合和背景噪音;
流程簡便:無需甲醛交聯(lián)、細胞破碎和超聲片段化DNA等步驟,簡化實驗操作流程;
簡化的文庫構(gòu)建:通過添加“接頭”到轉(zhuǎn)座子上,只需進行簡單的PCR擴增即可獲得高質(zhì)量的NGS文庫;
較低的測序深度:相較于ChIP方法,CUT&Tag方法在保持高質(zhì)量結(jié)果的同時,測序深度減少10倍左右,節(jié)省測序成本。
北京中科光析科學(xué)技術(shù)研究所承諾:我們將根據(jù)不同產(chǎn)品類型的特點,并結(jié)合不同行業(yè)和國家的法規(guī)標準,選擇適當?shù)臋z測項目和方法進行分析測試,或根據(jù)您的要求進行試驗分析。為了不斷改進我們的工作,我們致力于提高產(chǎn)品質(zhì)控分析、使用性能檢測能力,并持續(xù)加強我們團隊的科研技術(shù)。同時,我們將積極跟進新的技術(shù)和標準,以最大程度地滿足您的需求和市場要求。
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