咖啡漿果炭疽病菌鑒定檢測

2025-05-27 09:33:17

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原創(chuàng)版權(quán)

摘要：檢測項目病原菌分離培養(yǎng)、菌落形態(tài)觀察、分生孢子顯微測量、附著胞形成試驗、致病性測定、ITS序列分析、β-tubulin基因擴增、CAL基因測序、多重PCR鑒定、實時熒光定量PCR、LAMP快速檢測、抗藥性基因篩查、細胞壁降解酶活性測定、草酸產(chǎn)量分析、產(chǎn)孢量統(tǒng)計、溫度敏感性試驗、濕度適應性測試、寄主范圍測定、菌絲生長速率測定、孢子萌發(fā)率計算、殺菌劑敏感性試驗、毒素粗提物制備、HPLC毒素定量分析、超微結(jié)構(gòu)電鏡觀察、脂肪酸譜分析、碳源利用模式鑒定、揮發(fā)性代謝物檢測、拮抗菌篩選試驗、分子標記開發(fā)驗證、全基因組測

因業(yè)務調(diào)整，部分個人測試暫不接受委托，望見諒。

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檢測項目

病原菌分離培養(yǎng)、菌落形態(tài)觀察、分生孢子顯微測量、附著胞形成試驗、致病性測定、ITS序列分析、β-tubulin基因擴增、CAL基因測序、多重PCR鑒定、實時熒光定量PCR、LAMP快速檢測、抗藥性基因篩查、細胞壁降解酶活性測定、草酸產(chǎn)量分析、產(chǎn)孢量統(tǒng)計、溫度敏感性試驗、濕度適應性測試、寄主范圍測定、菌絲生長速率測定、孢子萌發(fā)率計算、殺菌劑敏感性試驗、毒素粗提物制備、HPLC毒素定量分析、超微結(jié)構(gòu)電鏡觀察、脂肪酸譜分析、碳源利用模式鑒定、揮發(fā)性代謝物檢測、拮抗菌篩選試驗、分子標記開發(fā)驗證、全基因組測序分析

檢測范圍

咖啡生豆表面樣本、咖啡果皮組織切片、咖啡花器官樣本、咖啡枝條病斑組織、咖啡葉片浸出液樣本、土壤根際微生物群落樣本、育苗基質(zhì)樣本、灌溉水樣沉淀物樣本、采收工具表面拭子樣本、加工設(shè)備殘留物樣本、倉儲環(huán)境空氣沉降樣本、包裝材料接觸面樣本、未成熟青果樣本、過熟發(fā)酵果樣本日曬干燥果樣本水洗處理廢水沉淀物樣本烘焙前后對比樣本有機種植園土壤樣本化學防治后殘留樣本生物防治劑載體樣本實驗室保存菌株復核樣本田間疑似病株分離樣本跨境貿(mào)易抽檢樣本加工副產(chǎn)品樣本氣候箱模擬病斑樣本離體葉片接種試驗樣本種子帶菌率檢測樣本器械消毒效果驗證樣本

檢測方法

1.形態(tài)學鑒定：依據(jù)CABI真菌名錄特征參數(shù)，采用PDA培養(yǎng)基28℃暗培養(yǎng)7天，測量分生孢子尺寸（長寬比1.5:1-2.5:1），觀察剛毛著生方式及附著胞形態(tài)特征。

2.分子生物學檢測：基于多基因位點系統(tǒng)發(fā)育分析，使用CTAB法提取基因組DNA，采用引物ITS1/ITS4擴增ITS區(qū)（預期產(chǎn)物550bp），GDF/GDR擴增β-tubulin基因（400bp），CL1C/CL2C擴增CAL基因（700bp），測序結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫進行BLAST比對。

3.實時熒光定量PCR：建立TaqMan探針法（FAM標記），靶向CkF01特異性基因片段（GenBank登錄號KT445678），設(shè)置Ct值≤35為陽性判定閾值。

4.毒素分析：采用甲醇-水（7:3）超聲提取粗毒素，HPLC-DAD檢測系統(tǒng)（C18色譜柱，流動相乙腈-0.1%甲酸水），在280nm波長下定量咖啡酸衍生物含量。

檢測標準

ISO22000:2018食品安全管理體系-食品鏈中各類組織的要求
GB/T36852-2018植物檢疫術(shù)語
SN/T1809-2006進出境植物病原真菌檢疫鑒定方法
EPPOPM7/98(2)Colletotrichumkahawae診斷規(guī)程
ISO/IEC17025:2017檢測和校準實驗室能力通用要求
GB23200.18-2016食品安全國家標準植物源性食品中草甘膦殘留量的測定
NY/T401-2000農(nóng)藥殘留分析實驗室質(zhì)量控制規(guī)范
GB/T3543.5-1995農(nóng)作物種子檢驗規(guī)程真實性和品種純度鑒定
ISO7218:2007食品和動物飼料微生物學-微生物檢驗通則
APHACompendiumofMethodsfortheMicrobiologicalExaminationofFoods

檢測儀器

1.PCR擴增儀：ABIVeritiPro梯度PCR儀支持多重溫度程序設(shè)定，滿足18srRNA通用引物與C.kahawae特異性引物的復合擴增需求。

2.熒光顯微鏡：OlympusBX53配備DP80雙攝像頭系統(tǒng)，實現(xiàn)相差與熒光成像同步采集，用于GFP標記菌株的侵染過程觀測。

3.UPLC-QTOF質(zhì)譜聯(lián)用儀：WatersXevoG2-XS系統(tǒng)具備<5ppm質(zhì)量精度，可完成次級代謝產(chǎn)物非靶向篩查。

4.全自動微生物鑒定系統(tǒng)：BiologGENIII微孔板配合OmniLog數(shù)據(jù)采集儀，通過碳源代謝指紋圖譜進行菌株分型。

5.超低溫離心機：Eppendorf5430R配備FA-45-30轉(zhuǎn)子，滿足DNA提取過程中12,000g離心力要求。

檢測報告作用用作

銷售報告：出具正規(guī)第三方檢測報告讓客戶更加信賴自己的產(chǎn)品質(zhì)量，讓自己的產(chǎn)品更具有說服力。

研發(fā)使用：擁有優(yōu)秀的檢測工程師和先進的測試設(shè)備，可降低了研發(fā)成本，節(jié)約時間。

司法服務：協(xié)助相關(guān)部門檢測產(chǎn)品，進行科研實驗，為相關(guān)部門提供科學、公正、準確的檢測數(shù)據(jù)。

大學論文：科研數(shù)據(jù)使用。

投標：檢測周期短，同時所花費的費用較低。

準確性較高;工業(yè)問題診斷：較短時間內(nèi)檢測出產(chǎn)品問題點，以達到盡快止損的目的。

我們的承諾

　　北京中科光析科學技術(shù)研究所承諾：我們將根據(jù)不同產(chǎn)品類型的特點，并結(jié)合不同行業(yè)和國家的法規(guī)標準，選擇適當?shù)臋z測項目和方法進行分析測試，或根據(jù)您的要求進行試驗分析。為了不斷改進我們的工作，我們致力于提高產(chǎn)品質(zhì)控分析、使用性能檢測能力，并持續(xù)加強我們團隊的科研技術(shù)。同時，我們將積極跟進新的技術(shù)和標準，以最大程度地滿足您的需求和市場要求。