眼科疾病模型實驗 - 造模類型

　　glaucoma模型 - 小鼠、眼角膜堿傷模型 - 小鼠、干眼癥模型 - 小鼠、葡萄膜炎模型 - 小鼠、Diabetes Retinopathy - 兔等
　　實驗方法及步驟：

　　人或動物體內(或胚胎)的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用如下方法進行原代細胞分離培養(yǎng)：

　　一、懸浮細胞的分離方法

　　1.將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。

　　2.去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復兩次。

　　3.用培養(yǎng)基重懸，調整適當細胞濃度后分瓶培養(yǎng)。

　　4.如選用懸液中某種細胞，可采用離心后的細胞分層液獲得目的細胞。

　　二、實體組織材料的分離方法

　　1、機械分散法

　　(1)纖維成分很少的腦組織，個別胚胎組織，用剪刀剪碎至1mm3的組織塊。

　　(2)用PBS清洗兩次后

　?、?用吸管吹打，分散組織細胞。

　?、?或將已充分剪碎分散的組織放在注射器內(用九號針)，使細胞通過針頭壓出。

　　③ 或在不銹鋼紗網(wǎng)內用鈍物(注射器鈍端)壓擠使細胞從網(wǎng)孔中壓擠出。

　　(3)將細胞轉入離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。

　　(4)去上清，加入含血清的培養(yǎng)基，重懸后移至培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

　　2、消化分離法

　　(1)酶消化分離法(過夜冷消化法)

　?、?細胞間質較少的軟組織，如肝、腎、甲狀腺、羊膜、胚胎組織、上皮組織等，用Hanks液清洗組織三次，剪成碎塊大小為4毫米左右。

　?、?再用Hanks液洗2-3次以除去血球和脂肪組織。

　?、?加入0.25%的胰蛋白酶，搖勻后放4℃過夜。

　?、?次日再用Hanks液洗滌，棄去上清，共洗2-3次。

　?、?加入少量含血清的培養(yǎng)基吹打分散，細胞計數(shù)，按適當?shù)臐舛确制颗囵B(yǎng)。

　　(2)非酶消化法(EDTA消化法)

　?、?把組織塊剪碎，呈1mm3大小的組織塊。

　?、?將碎組織塊在平皿中用無鈣鎂PBS洗2-3次。

　?、?加入消化液(胰蛋白酶或膠原酶或EDTA)于37℃水浴中作用適當時間(中間可輕搖1~2次)，若組織塊膨松呈絮狀可終止，若變化不大可更換一次消化液，繼續(xù)消化直至膨松絮狀為止。

　?、?棄去上清，加入含有鈣、鎂離子的培養(yǎng)基中止消化反應，并洗滌2-3次后，加入完全培養(yǎng)基。

　?、?用吸管吹打，使細胞充分散開后用紗網(wǎng)過濾后分瓶培養(yǎng)。

　　3、原代細胞培養(yǎng)

　　原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取細胞進行培養(yǎng)。由于細胞剛剛從活體組織分離出來，故更接近于生物體內的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖增加有力的手段，同時也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。利用此方法還可直接服務于臨床實踐。例如，用從手術中切除的tumour細胞進行原代培養(yǎng)，然后用該培養(yǎng)細胞進行抗ai藥物的篩選，根據(jù)zl細胞對加入的化療藥物的敏感性來幫助選擇有效的化療方案，有可能起到增強療效、降低副作用的作用。

　　4、原代細胞的傳代、保存

　　(1)傳代：依椐細胞的生長狀態(tài)，生長的細胞1：2或1：3進行傳代。

　　(2)保存：DMSO+培養(yǎng)液+血清

　　按下列順序降溫：室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃ 過夜)→液氮。

　　5、原代細胞的復蘇

　　(1)取出細胞，迅速放入37℃溫水中快速解凍。

　　(2)吸出細胞懸液，并加10倍以上培養(yǎng)液。

　　(3)用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶，放入37℃ CO2 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。

　　6、個別實驗結果：

　　(1)成骨細胞誘導

　　(2)大鼠脂肪干細胞

　　(3)骨髓間充質干細胞

　　(4)人腰椎軟骨細胞原代

我們的承諾

　　北京中科光析科學技術研究所承諾：我們將根據(jù)不同產(chǎn)品類型的特點，并結合不同行業(yè)和國家的法規(guī)標準，選擇適當?shù)臋z測項目和方法進行分析測試，或根據(jù)您的要求進行試驗分析。為了不斷改進我們的工作，我們致力于提高產(chǎn)品質控分析、使用性能檢測能力，并持續(xù)加強我們團隊的科研技術。同時，我們將積極跟進新的技術和標準，以最大程度地滿足您的需求和市場要求。