檢測(cè)項(xiàng)目

雙抗試驗(yàn)的核心檢測(cè)項(xiàng)目包含以下七項(xiàng)關(guān)鍵指標(biāo)：

• 抗原-抗體結(jié)合活性：通過標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度測(cè)試驗(yàn)證雙抗體對(duì)目標(biāo)抗原的捕獲與檢測(cè)能力
• 親和力測(cè)定：采用表面等離子共振技術(shù)測(cè)定抗體-抗原復(fù)合物的解離常數(shù)（KD值）
• 特異性驗(yàn)證：評(píng)估與結(jié)構(gòu)類似物及樣本基質(zhì)中常見干擾物質(zhì)的交叉反應(yīng)率
• 靈敏度分析：確定最低檢測(cè)限（LOD）與定量限（LOQ）的統(tǒng)計(jì)學(xué)置信區(qū)間
• 線性范圍驗(yàn)證：在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)進(jìn)行5個(gè)濃度梯度的線性回歸分析
• 精密度測(cè)試：通過批內(nèi)重復(fù)（n=20）與批間重復(fù)（3批次）實(shí)驗(yàn)計(jì)算CV值
• 穩(wěn)定性研究：包括試劑開瓶穩(wěn)定性、凍融穩(wěn)定性及長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性評(píng)估

檢測(cè)范圍

本試驗(yàn)適用于以下三類主要應(yīng)用場(chǎng)景：

• 生物制藥領(lǐng)域：治療性單抗藥物的表位鑒定、藥物活性測(cè)定及工藝殘留蛋白檢測(cè)
• 臨床診斷領(lǐng)域：血清/血漿中腫瘤標(biāo)志物（如CEA、AFP）、傳染病抗體及激素水平檢測(cè)
• 科研實(shí)驗(yàn)領(lǐng)域：細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織裂解液等復(fù)雜基質(zhì)中的低豐度蛋白定量分析

典型樣本類型包括但不限于：人/動(dòng)物血清（體積≥100μL）、細(xì)胞培養(yǎng)上清（無菌采集）、凍存組織勻漿液（-80℃保存）、重組蛋白溶液（濃度≥0.1mg/mL）以及經(jīng)0.22μm過濾的發(fā)酵液樣品。

檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)化的雙抗試驗(yàn)執(zhí)行流程包含以下關(guān)鍵步驟：

1. 固相包被優(yōu)化：采用碳酸鹽緩沖液（pH9.6）進(jìn)行96孔板包被，通過正交實(shí)驗(yàn)確定最佳抗體濃度（通常0.5-5μg/mL）及孵育條件（4℃過夜或37℃ 2h）
2. 封閉條件篩選：對(duì)比BSA（1-5%）、脫脂奶粉（3-5%）及商業(yè)化封閉液的背景信號(hào)抑制效果
3. 信號(hào)系統(tǒng)構(gòu)建：根據(jù)檢測(cè)需求選擇HRP/ALP酶標(biāo)記系統(tǒng)或熒光/化學(xué)發(fā)光標(biāo)記系統(tǒng)
4. 動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定：使用酶標(biāo)儀在特征波長(zhǎng)下（如HRP的450nm）連續(xù)監(jiān)測(cè)顯色反應(yīng)進(jìn)程
5. 數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理：采用四參數(shù)logistic曲線擬合計(jì)算樣本濃度值并驗(yàn)證R2＞0.99的擬合優(yōu)度

檢測(cè)儀器

完成雙抗試驗(yàn)需配置以下五類核心設(shè)備：

注：所有儀器均需定期進(jìn)行IQ/OQ/PQ驗(yàn)證并保留完整的校準(zhǔn)記錄文件。

本文件所述方法符合ISO/IEC17025體系要求及《中國藥典》2020版四部通則相關(guān)規(guī)范。